Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:09 min • July 8th, 2025
La réaction en chaîne par polymérase fondue à haute résolution, HRM-PCR, détecte les variations de séquence d’ADN double brin et d’ADNdb avec une grande précision.
Commencez par un mélange maître contenant de la Taq polymérase inactive, des désoxyribonucléotides triphosphates (dNTP) et le colorant rapporteur fluorescent. Ajoutez les amorces avant et arrière. Pipetez le mélange dans les puits d’une plaque PCR.
Ajoutez le modèle d’ADNdb. Scellez la plaque en empêchant l’évaporation du mélange. Commencez la PCR.
La température de dénaturation élevée dénature l’ADNdb en ADN simple brin, l’ADNsb, et active la polymérase. La réaction est ensuite refroidie à la température de recuit, facilitant la liaison des amorces avant et inverse aux ADNsb via un appariement de bases complémentaires spécifique au site.
La polymérase activée est recrutée, ce qui prolonge le duplex de l’amorce d’ADN par l’ajout de dNTP.
Le colorant rapporteur fluorescent – un colorant spécifique de l’ADNdb présent à des concentrations saturées – s’intercale dans l’ensemble du duplex, devenant fluorescent vivement. Le duplex subit plusieurs cycles de PCR, produisant plusieurs fragments contenant des variants.
Après la PC
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