Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:28 min • July 8th, 2025
La méthylation des résidus de cytosine de l’ADN est une caractéristique des leucocytes ou des globules blancs.
La réaction en chaîne par polymérase par gouttelettes multiplexes, ou mdPCR, permet l’identification simultanée de plusieurs régions d’ADN méthylées dans les leucocytes.
Préparez un mélange contenant un tampon de réaction, de l’ADN polymérase et de l’eau sans nucléases. Ajoutez des amorces avant et inverse et des sondes d’hydrolyse fluorescentes spécifiques à chaque région cible. Les sondes comprennent des rapporteurs fluorophores de couleurs différentes liés à des extincteurs pour inhiber l’émission de fluorescence.
Ajoutez de l’ADN converti au bisulfite, dans lequel les cytosines non méthylées sont désaminées en uraciles tandis que les cytosines méthylées restent inchangées. Mélanger.
Remplissez une seringue en verre avec un mélange d’huile de support et de tensioactif et une autre avec un mélange d’huile de support et de PCR, et connectez-les au générateur de gouttelettes microfluidique. Le mélange PCR aqueux s’émulsionne en gouttelettes de la taille d’un nanolitre. Le tensioactif stabilise l’émulsion et empêche la fusion des gouttelettes.
Collectez les gouttelettes et
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