Imagerie FLIM-FRET pour la caractérisation des interactions protéine-protéine chez les bactéries vivantes
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:26 min • July 8th, 2025
Pour étudier des interactions protéine-protéine spécifiques dans des bactéries vivantes à l’aide de la microscopie d’imagerie à durée de vie de fluorescence, FLIM, combinée au transfert d’énergie de résonance de Förster, FRET, commencez par une suspension bactérienne recombinante. Les bactéries expriment des protéines cytoplasmiques spécifiques impliquées dans les voies métaboliques, marquées avec des protéines fluorescentes donneuses et accepteuses adaptées à la FRET.
Repérez la suspension bactérienne sur un tampon d’agarose, qui immobilise les bactéries sur une lame de microscope. Placez une lamelle sur la glissière et scellez-la.
Positionnez la lame sur la platine d’un microscope à balayage inversé à excitation biphotonique pour la microscopie FLIM-FRET. Utilisez une lampe à fluorescence pour sélectionner et scanner une région d’intérêt sur la monocouche bactérienne.
L’interaction entre les protéines cytoplasmiques exprimées rapproche les protéines fluorescentes donneuses et accepteuses dans une orientation appropriée. Lors de l’éclairage laser avec une longueur d’onde appropriée, la protéine fluorescente du donneur est excitée.
La proximité des protéines fluorescentes déclenche
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