Résonance plasmonique de surface pour étudier les interactions biomoléculaires à l’aide d’une puce de capteur

Pour effectuer une résonance plasmonique de surface, ou SPR, pour étudier les interactions biomoléculaires, commencez par une puce de capteur positionnée au-dessus d’un détecteur SPR dans une cellule d’écoulement. Cette puce de capteur recouverte de métal a une couche de matériau hydrogel déposée sur la surface de la puce, ce qui la rend mieux adaptée à l’immobilisation des protéines.

Superposez la puce avec des peptides viraux, qui interagissent avec l’hydrogel et s’immobilisent à la surface. Laver avec une solution de trempe alcaline qui empêche les interactions protéiques non spécifiques.

Dirigez la lumière polarisée sur la puce. À l’angle de résonance, les électrons métalliques absorbent cette lumière et résonnent, réduisant l’intensité de la lumière réfléchie à l’angle réfléchi correspondant.

Le photodétecteur collecte cette lumière réfléchie et le processeur convertit ce signal en ligne de base, générant un sensorgramme, un graphique représentant la réponse du capteur en fonction du temps.

Versez une solution d’agent antiviral dans la cellule d’écoulement. Pendant le flux, les agents antiviraux interagissent avec les peptides viraux immobilisés sur la puce. Cette association modifie l’indice de réfraction, ce qui modifie l’angle et l’intensité de la lumière réfléchie, ce qui entraîne finalement une réponse du capteur.

Ajoutez un tampon de lavage à haute force ionique qui perturbe l’interaction entre les deux molécules, conduisant à leur dissociation et diminuant la réponse du capteur.

Analyser la forme du sensorgramme, et évaluer l’association et la dissociation des deux molécules cruciales dans les interactions biomoléculaires.

Pour le système SPR à double canal, utilisez HBS-EP+ comme tampon de fonctionnement, de l’acide chlorhydrique glycine 10 millimolaires de pH 1,5 à 1,6 comme tampon de régénération, et allumez le dégazeur de l’instrument, l’échantillonneur automatique et la pompe. Ensuite, lavez l’ensemble du système avec de l’eau doublement distillée pendant 1 heure.

Ensuite, déposez de l’huile d’immersion sur le détecteur et montez une puce de capteur en verre recouverte d’une fine pellicule d’or, et sur la face supérieure fonctionnalisée avec de l’hydrogel de carboxyméthyldextran directement sur le détecteur sous la cellule d’écoulement à trois ports. Ensuite, fixez le réglage en abaissant la manipulation.

Pour immobiliser les ligands protéiques sur les puces du capteur, ouvrez une table d’exécution en cliquant sur Formulaire dans la barre de menu, puis exécutez l’éditeur de table dans le logiciel SPRAutoLink intégré. Ensuite, choisissez et cliquez sur BASIC_Immobilization dans la liste des tables d’exécution disponibles, et suivez les étapes de la procédure expérimentale sur l’écran de l’ordinateur.

Ensuite, cliquez sur Sample Set Editor dans la section Formulaire pour remplir la liste des réactifs pour deux racks placés dans l’échantillonneur automatique pour des analyses plus approfondies. Cliquez sur Contrôle direct de l’échantillonneur automatique en tant qu’outil dans la barre de menu pour avancer ou reculer les racks à la maison, et choisissez 4 degrés Celsius comme température de fonctionnement.

Démarrez la pompe pour infuser de l’eau bidistillée en cliquant sur Outils et « Contrôle direct de la pompe », et enregistrez les données en cliquant sur « Contrôle direct de l’instrument SPR », et à chaque fois, commencez dans la nouvelle fenêtre qui apparaît. Après avoir ajouté les réactifs de couplage dans des flacons de 300 microlitres, placez-les dans les racks de l’échantillonneur automatique et démarrez la table d’exécution en cliquant sur Exécuter.

Pour une interaction protéine-protéine simple après avoir rempli la pompe à 25 000 microlitres par minute, effectuez un réglage de la ligne de base pendant 30 secondes. Permettre l’ajustement de base ultérieur avec de l’eau bi-distillée pendant 1,5 minute avant d’éteindre la surface de la puce activée avec 1 molaire de chlorhydrate d’éthanolamine, pH 8,5. Ensuite, passez les tubes de l’échantillonneur de liquide au dégazeur de l’eau bidistillée dans la bouteille avec HBS-EP+.

Cliquez sur Formulaire, faites défiler vers le bas et passez à « Post-traitement » en cliquant sur ce mode de fonctionnement. Ensuite, cliquez sur Ajouter pour sélectionner les courbes de liaison générées au fil du temps dans le formulaire de tracé de données pour chaque cellule de flux, et exportez la superposition sous forme de fichier de curseur. Ensuite, cliquez sur Fichier pour ouvrir les options d’enregistrement de fichiers et obtenir des courbes de réponse en alignant les courbes gauche et droite et en soustrayant les signaux du deuxième canal de référence de ceux du canal ligand.