Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 6:05 min • July 8th, 2025
La spectroscopie par résonance magnétique nucléaire, ou RMN, permet la détection des interactions protéine-protéine au niveau atomique.
Pour étudier les interactions entre les protéines globulaires et hélicoïdales, marquez les protéines globulaires purifiées de type sauvage ou mutantes avec du 15N, un isotope de l’azote. Dans un tube RMN, mélangez les protéines globulaires marquées et les protéines hélicoïdales non marquées dans un solvant contenant un étalon RMN. Insérez le tube dans le spectromètre RMN.
Les aimants du spectromètre génèrent un champ magnétique puissant, alignant les noyauxde protéines globulaires 15 marqués N parallèlement au champ. Une impulsion de radiofréquence, ou RF, excite les 15noyaux N pour qu’ils s’alignent antiparallèlement au champ.
La fréquence d’impulsion nécessaire à la transition des noyaux 15N entre les deux états définit la fréquence de résonance. La normalisation de la fréquence de résonance 15N par rapport à la norme RMN mesure le décalage chimique 15N.
Le champ magnétique est ajusté pour aligner les noyaux 1H – liés à 15N – parallèlement au champ. Les impulsions RF sont ajustées et le décalage chimique de 1H est enregistré.
Au cours des interac
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