Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
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Commencez l’affichage des phages en ajoutant une bibliothèque de phages dans les puits d’une plaque multi-puits, recouverte de protéine cible. La bibliothèque de phages contient des phages génétiquement modifiés, chacun présentant une variante protéique individuelle fusionnée à une protéine d’enveloppe à sa surface. Incuber, permettant au phage et aux protéines cibles d’interagir.
Les phages contenant des protéines ayant une affinité élevée pour la protéine cible se lient à la protéine cible. Laver avec un tampon, en éliminant les phages non liés. Ajoutez une solution acide, perturbant les interactions entre le phage et les protéines cibles, libérant des phages dans la solution. Neutralisez le pH de la solution à l’aide d’un tampon, en maintenant la stabilité du phage.
Transférez les phages dans un tube frais. Incuber avec une solution bloquante contenant des protéines, empêchant les interactions non spécifiques.
Transférez les phages dans une suspension d’E. coli à division active, infectant les bactéries et initiant le cycle de réplication des phages. Complétez avec des phages auxiliaires, qui infectent les bactéries, fournissant les protéines d’enveloppe nécessaires à l’emballag
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