Immunoprécipitation de la chromatine pour identifier les sites de liaison aux protéines cibles sur l’ADN génomique

Pour identifier les sites de liaison d’une protéine cible sur l’ADN, commencez par des cellules précurseurs d’oligodendrocytes contenant une protéine cible réticulée à des séquences d’ADN spécifiques dans la chromatine.

Traitez les cellules avec un tampon de lyse contenant des inhibiteurs de protéase. Le tampon de lyse lyse les cellules, tandis que les inhibiteurs inactivent les protéases pour conserver l’intégrité des complexes protéine-chromatine.

Sonicez le contenu pour cisailler les complexes en fragments de chromatine plus petits, certains conservant la protéine cible.

Centrifuger pour granuler les composants cellulaires et transférer le surnageant contenant des fragments de chromatine dans un tube frais. Incuber avec des anticorps anti-cibles qui se lient spécifiquement à la protéine cible sur les fragments de chromatine.

Complétez le tube avec des billes magnétiques enrobées de protéine A qui se lient à la région Fc des anticorps pré-liés. Appliquez un champ magnétique pour précipiter sélectivement les protéines cibles liées aux anticorps complexées avec des fragments de chromatine.

Traitez les complexes de billes avec un tampon d’élution à haute teneur en sel pour perturber