Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 2:43 min • July 8th, 2025
Les interactions protéine-phospholipide sur la membrane cellulaire sont cruciales pour la régulation de plusieurs processus cellulaires.
Pour détecter les interactions protéine-phospholipide cibles in vitro à l’aide de la cytométrie en flux quantitative, prenez un tube contenant une concentration souhaitée de mimique de membrane cellulaire (vésicules phospholipidiques de la taille d’un micron et marquées à un colorant lipophile) dans un tampon.
Ajouter une concentration appropriée de différentes protéines cibles marquées par fluorescence dans la solution.
Injectez la suspension dans le cytomètre en flux. Réglez les paramètres du système fluidique sur un faible débit pour laisser suffisamment de temps pour les interactions protéine-phospholipide.
Au fur et à mesure que les protéines marquées par fluorescence et les vésicules phospholipidiques interagissent dans le canal d’écoulement, la concentration de protéines liées aux vésicules augmente.
Lorsque ces complexes traversent les faisceaux laser à partir de canaux de fluorescence spécifiques fournissant des longueurs d’onde appropriées, ils deviennent excités. Ces protéines excitées et les vésicules phospholipidiques du complexe émet
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