Imagerie d’une seule molécule pour visualiser l’assemblage de condensats de protéines de fusion sur des rideaux d’ADN

Une protéine de fusion oncogénique chimérique contient le domaine N-terminal de faible complexité, LCD, d’une protéine de liaison à l’ARN fusionnée avec le domaine de liaison à l’ADN, DBD, d’une protéine de facteur de transcription. Ces protéines forment un condensat de protéines, qui recrute l’ARN polymérase-II et stimule l’oncogenèse.

Pour visualiser l’assemblage des condensats de protéines par imagerie à molécule unique, commencez par une cellule de flux d’ADN, une lame de verre de silice fondue équipée d’orifices d’injection à l’entrée et à la sortie. La surface de la cellule d’écoulement est recouverte d’une bicouche lipidique biotinylée pour protéger la surface et fabriquée avec une barrière en zigzag.

Connectez-le à un système microfluidique. Introduisez une solution de streptavidine, qui se lie à son ligand à haute affinité de liaison, la biotine, sur la couche lipidique. Injectez de l’ADN lambda double brin marqué à la biotine, qui contient plusieurs répétitions de séquences de liaison aux protéines de fusion. La streptavidine de la bicouche lipidique se lie à la biotine de l’ADN et attache l’ADN lambda à la bicouche.

Rincez avec un tampon approprié. La force hydrodynamiqu