Dosage de la modulation du pH sur les bicouches lipidiques supportées pour détecter les interactions protéine-phosphoinositide

Le phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate, ou PIP2, est un phospholipide phosphorylé mineur lié à la membrane. La phospholipase C, ou PLC, avec des domaines spécifiques de liaison à PIP2, se lie à PIP2, générant des messagers secondaires essentiels à plusieurs processus cellulaires.

Pour détecter les interactions PLC-PIP2 in vitro, commencez par une petite vésicule unilamellaire, SUV, en suspension acide, comprenant un mélange de PIP2 et de phospholipides, dont l’un est conjugué à un colorant fluorescent sensible au pH.

Pipetez la solution dans le tube d’entrée et de sortie d’un dispositif microfluidique pré-assemblé. Transférez et fixez l’appareil sur une platine de microscope à fluorescence. Par gravité, les SUV traversent le plancher à microcanaux, constitué d’une lamelle en verre hydrophile.

Les SUV s’adsorbent sur la surface du verre, le pH de la solution réduisant la répulsion électrostatique entre les deux. Les SUV interagissent avec la surface, se déforment et fusionnent pour former de grandes vésicules.

Après une couverture de surface critique, les vésicules se rompent spontanément, formant une bicouche lipidique soutenue, SLB. Passez un tampon à travers le canal, en élimin