Spectroscopie quantitative RMN de l’hydrogène dans la cellule pour surveiller les interactions protéine-ligand

Pour surveiller les interactions des protéines cibles avec les ligands de test de petites molécules dans un environnement cellulaire natif, commencez par un tube RMN rempli d’un tampon contenant un bouchon de gel à la base. Injectez les cellules exprimant la protéine cible, intégrées dans l’agarose dans le tube RMN, en formant des structures filiformes.

Chargez le tube dans l’unité d’écoulement d’un bioréacteur, en fournissant un milieu de croissance pour maintenir la viabilité cellulaire. Insérez l’unité d’écoulement à l’intérieur d’un instrument de résonance magnétique nucléaire ou RMN.

Sous l’effet d’un champ magnétique puissant, les noyaux atomiques des atomes d’hydrogène des protéines sont magnétisés et s’alignent parallèlement au champ, s’adaptant à un état de basse énergie.

Appliquez une impulsion de radiofréquence, provoquant l’alignement des noyaux anti-parallèle au champ magnétique, ce qui leur permet de passer à des états d’énergie plus élevés.

Après une brève impulsion, les noyaux reviennent à leur position d’origine, émettant de l’énergie absorbée. Le détecteur capte cette énergie, générant un spectre RMN représentant les fréquences de résonance de l’atome d’hydrogène.