Test de rapporteur basé sur ELISA pour étudier l’interaction récepteur-ligand dans les cellules BW

Pour étudier les interactions récepteur-ligand, commencez avec une plaque multipuits contenant des milieux avec des cellules cibles exprimant des ligands de test à leur surface.

Ajoutez des cellules BW de souris modifiées - une nouvelle population de cellules B exprimant des récepteurs chimériques liés à la membrane. Les récepteurs chimériques comprennent le domaine extracellulaire d’un récepteur spécifique fusionné au domaine de signalisation transmembranaire et intracellulaire du récepteur des cellules B.

Les ligands des cellules cibles interagissent avec le domaine extracellulaire des récepteurs chimériques des cellules BW, provoquant l’activation du domaine de signalisation intracellulaire dans les cellules BW. Cela déclenche la signalisation en aval et la production de cytokines – des molécules rapporteures sécrétoires qui sont libérées à l’extérieur des cellules BW, apparaissant dans les médias.

Centrifugez la plaque. Transférez le surnageant contenant des cytokines dans une plaque ELISA pré-enduite d’anticorps anti-cytokines. Les cytokines interagissent avec les régions Fab des anticorps, conduisant à leur immobilisation à la surface de la plaque.

Traitez la plaque avec une