Sonde de force biomembranaire pour quantifier les interactions récepteur-ligand

L’interaction entre un récepteur de lymphocytes T, TCR, et un peptide antigénique présenté par le CMH, ou complexe majeur d’histocompatibilité, sur une cellule présentatrice d’antigène, APC, fait que les lymphocytes T exercent une force mécanique sur l’APC. Ce phénomène est nécessaire à l’activation des lymphocytes T.

Pour quantifier les interactions récepteur-ligand à l’aide d’une sonde de force biomembranaire, BFP, commencez par une chambre cellulaire personnalisée basée sur des lames. Placez la chambre cellulaire sous un microscope.

Injectez dans la chambre des suspensions de globules rouges gonflés biotinylés, des billes de verre sondées recouvertes de complexes CMH-streptavidine-biotine liés aux peptides et des lymphocytes T. Positionnez la sonde, la cible et les micropipettes auxiliaires remplies de tampon autour de la chambre.

Aspirez un globule rouge biotinylé à l’aide de la pipette à sonde, en le positionnant dans une zone blanche. Aspirez une cellule T avec la micropipette cible, en la positionnant sur la droite du globule rouge. Aspirez une perle de sonde à l’aide de la micropipette auxiliaire et fixez-la à l’apex du RBC. La streptavidine de la perle se lie à la biotine