Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:05 min • July 8th, 2025
protéines de liaison aux nucléotides de la guanine – une catégorie de GTPases – fonctionnent comme un interrupteur moléculaire, alternant entre une forme active liée au GTP et une forme inactive liée au GDP.
Les GTPases actives se lient à des partenaires protéiques spécifiques. Ces partenaires se disputent le même site de liaison sur les GTPases.
Pour étudier la liaison compétitive, commencez par prendre une suspension de GTPase liée à GTP immobilisée sur des billes magnétiques. Ajoutez le premier partenaire d’interaction - la protéine A marquée par fluorescence. Incuber sous agitation pour maintenir les billes en suspension. La protéine A se lie et sature les sites de liaison sur toutes les molécules de GTPase.
Répartissez cette solution de manière égale en plusieurs tubes. Ajoutez un deuxième partenaire d’interaction – la protéine B marquée par fluorescence – aux tubes en quantités croissantes. Incuber sous agitation.
La protéine B se lie au même site de liaison sur les GTPases, déplaçant ainsi la protéine A.
Exposez les tubes à un champ magnétique pour recueillir les billes d’un côté. Jetez le surnageant pour éliminer les protéines non liées. Remettre en suspension les bille
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