Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:56 min • July 8th, 2025
Les nucléosomes – des unités répétitives d’ADN eucaryote – sont constitués de segments d’ADN enroulés autour de noyaux de protéines d’histones. Le déballage de l’ADN autour du noyau d’histones est crucial pour la dynamique des nucléosomes.
Pour capturer la dynamique des nucléosomes, commencez par un substrat de mica lisse et fonctionnalisé monté sur un microscope à force atomique, AFM, une platine de scanner. Recouvrir le substrat d’un tampon contenant des nucléosomes.
L’ADN nucléosomique chargé négativement interagit avec les charges positives sur le mica fonctionnalisé, les immobilisant à la surface. Lavez le substrat de mica immobilisé avec un tampon pour éviter l’encombrement des nucléosomes.
Transférez l’étage du scanner contenant des nucléosomes dans une chambre d’imagerie contenant un cantilever pré-monté, avec une pointe sur le bord et tournée vers le haut vers les nucléosomes.
Remplissez la chambre avec un tampon d’imagerie. Alignez le faisceau laser sur le dos du porte-à-faux pour assurer des mesures de déflexion précises.
L’extrémité AFM oscille près des nucléosomes entièrement enveloppés et balaye la surface pour mesurer la hauteur des nucléosomes à intervalles régulier
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