Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
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Les phosphorylations multiples dans une protéine impliquent l’ajout de groupes phosphate à la protéine à diverses positions, en particulier au niveau des résidus de sérine et de thréonine.
Pour identifier plusieurs phosphorylations dans une protéine, commencez par un tube contenant des protéines phosphorylées marquées à l’azote-15, qui aide à différencier les hydrogènes amides des autres hydrogènes de la protéine.
Ajoutez un composé de référence RMN interne pour une mesure précise des fréquences de résonance relatives. Transférez le mélange dans un tube à résonance magnétique nucléaire, ou RMN. Insérez le tube dans une ouverture tournante et placez-le dans un spectromètre RMN.
La présence de phosphates présente des effets de retrait d’électrons dans les résidus phosphorylés de sérine et de thréonine. En conséquence, les hydrogènes amides des résidus phosphorylés semblent être déblindés avec des densités d’électrons inférieures à celles des autres hydrogènes amides.
Les hydrogènes amides avec des environnements électroniques variables subissent des champs magnétiques différentiels autour des noyaux, atteignant des états de basse énergie.
Appliquer une brève impulsion de radiofréquen
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