La technique de spectroscopie de dichroïsme circulaire pour étudier les interactions ADN-protéines

Les

protéines de remodelage de la chromatine dépendantes de l’ATP régulent l’expression des gènes dans la chromatine serrée en modifiant la conformation de l’ADN de manière dépendante de l’ATP.

Pour étudier les interactions entre le remodeleur de la chromatine et l’ADN à l’aide de la spectroscopie de dichroïsme circulaire, ou CD, prenez une solution d’oligonucléotides d’ADN double brin. Chauffer pour dénaturer les oligonucléotides, et placer sur de la glace.

Le refroidissement rapide provoque la renature de l’ADN tout en formant des structures secondaires. La région de transition double à simple brin fournit un site de liaison optimal pour les remodeleurs de la chromatine.

Ajoutez l’ADN refroidi thermiquement dans une cuvette. Ajoutez un tampon contenant un remodeleur de chromatine dépendant de l’ATP, de l’ATP et des ions magnésium.

Le remodeleur se lie à l’ADN, puis se lie à l’ATP complexe par des ions magnésium à la protéine, l’activant. Le remodeleur activé hydrolyse l’ATP - induisant une conformation tige-boucle dans l’ADN.

Faites passer la lumière polarisée circulairement gauche et droite, avec une différence de phase de 90°, à travers l’échantillon. L’ADN optiquement chiral a