Culture in vitro et différenciation des monocytes primaires en macrophages

Les monocytes sont des cellules immunitaires qui se différencient en macrophages et en cellules dendritiques présentatrices d’antigènes pour se protéger contre les infections.

Pour cultiver des monocytes et induire leur différenciation in vitro, il faut commencer par prendre une suspension de monocytes humains primaires dans un milieu de culture approprié. Ajouter la suspension cellulaire dans les puits d’une plaque de culture. Incuber dans des conditions physiologiques pour permettre aux cellules d’adhérer.

Ajoutez des cytokines induisant la différenciation - le facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages, ou GM-CSF, à un puits et le facteur de stimulation des colonies de macrophages, ou M-CSF, à un autre. Incuber pour une durée appropriée.

Le GM-CSF se lie à son récepteur hétérodimérique sur les cellules et induit la différenciation des monocytes. La liaison GM-CSF entraîne l’activation des voies de signalisation intracellulaires, conduisant à l’expression de gènes pour l’amorçage dans un phénotype de type macrophage M1.

Les cellules de type M1 – des cellules arrondies avec un grand volume cytoplasmique – sont pro-inflammatoires et aident à la défense contre l’infection.

Dans l’autre puits, le M-CSF se lie à son récepteur homodimérique sur les monocytes et induit la différenciation des cellules. La liaison du M-CSF entraîne l’activation de voies de signalisation intracellulaires différentes de celles du GM-CSF, conduisant à l’expression de gènes pour l’amorçage dans un phénotype de type macrophage M2.

Les cellules de type M2 – de forme allongée – sont anti-inflammatoires et présentent des fonctions de remodelage et de réparation des tissus.

Les cellules macrophages différenciées sont prêtes pour d’autres essais en aval.

Après le comptage, remettez en suspension les monocytes isolés à raison de 1 fois 10 à six cellules par millilitre de milieu RPMI 1640 sans sérum à 37 degrés Celsius complété par des antibiotiques, et mettez 1 millilitre de cellules en suspension dans des plaques de 35 millimètres dans une enceinte de biosécurité. Ensuite, placez les plaques dans l’incubateur de culture cellulaire pendant 30 à 60 minutes pour permettre aux cellules d’adhérer au fond du puits.

Pour préparer les macrophages avec un phénotype de type M1, ajoutez 100 microlitres de sérum fœtal bovin contenant 25 nanogrammes par millilitre de GM-CSF dans chaque plaque. Pour préparer les macrophages avec un phénotype de type M2, ajoutez 100 microlitres de fœtus bovin contenant 50 nanogrammes par millilitre de M-CSF dans chaque plaque.