Essai de dégranulation des mastocytes pour étudier l’effet d’un produit chimique cible

Les mastocytes - des globules blancs spécialisés, contiennent des granules sécrétoires riches en enzymes lysosomales, telles que la bêta-hexosaminidase.

Pour effectuer la dégranulation des mastocytes - un processus impliquant la libération de granules sécrétoires, commencez par une plaque multipuits contenant une suspension de mastocytes péritonéaux murins prétraitée avec des immunoglobulines.

Traitez les cellules avec un produit chimique cible. Le produit chimique cible au potentiel stimulant interagit avec les immunoglobulines pré-liées sur les récepteurs spécifiques des mastocytes. Cela active le mouvement des granules contenant de la bêta-hexosaminidase vers la surface cellulaire, la libérant dans la solution.

Centrifugez la plaque pour granuler les cellules et transférez le surnageant contenant l’enzyme dans un puits vide d’une plaque fraîche. Traitez les culots cellulaires avec un tampon de lyse pour lyser les cellules et libérer leur contenu dans le lysat, y compris la bêta-hexosaminidase intracellulaire.

Ajoutez le lysat contenant de l’enzyme dans un autre puits de la même plaque à plusieurs puits. Traitez les deux puits avec le substrat de l’enzyme, la p-nitrophényl-acétyl