Isolement et culture de cellules de Kupffer de souris

Les cellules de Kupffer sont des macrophages résidents localisés dans les sinusoïdes hépatiques qui aident à protéger le foie contre les infections.

Pour isoler les cellules de Kupffer de souris, prélevez un foie de souris perfusé fraîchement récolté dans une boîte contenant du milieu. L’étape de perfusion hépatique avec la collagénase digère la matrice extracellulaire, provoquant la dissociation des cellules hépatiques.

Rompez la capsule hépatique pour libérer les cellules hépatiques dissociées, y compris les cellules parenchymateuses, les cellules PC, et les cellules non parenchymateuses, les NPC, y compris les cellules de Kupffer, les cellules endothéliales, les cellules stellaires et les érythrocytes restants.

Filtrez pour enlever les débris. Effectuer une centrifugation différentielle à basse vitesse sur le filtrat pour sédimenter sélectivement les PC. Collecter le surnageant contenant des NPC. Centrifugeuse pour concentrer les cellules.

Remettre les cellules en suspension dans le milieu et les superposer sur un gradient de densité isotonique discontinu avec deux couches de milieux dégradés de densités différentes. Avec la centrifugation, les cellules se séparent en fonction d