Isolement des macrophages du ganglion de la racine dorsale de la souris par dissociation mécanique

Le ganglion de la racine dorsale, ou DRG, est un groupe de corps cellulaires neuronaux le long de la moelle épinière qui transportent des informations sensorielles du système nerveux périphérique au système nerveux central. Les lésions nerveuses périphériques provoquent l’accumulation de macrophages dans le DRG et le développement de douleurs neuropathiques.

Pour isoler des macrophages viables à l’aide d’une méthode sans enzyme, prélevez du tissu DRG de souris fraîchement disséqué dans un homogénéisateur rempli d’un tampon glacé pour limiter le stress cellulaire. À l’aide d’un pilon, homogénéisez mécaniquement le tissu pour libérer les cellules.

Filtrer à travers une crépine cellulaire pour éliminer les amas cellulaires et obtenir une suspension unicellulaire dans le flux. L’homogénat de tissu contient des neurones et des cellules non neuronales, qui comprennent des macrophages et de la myéline flottante – la gaine isolante des neurones.

Ajouter l’homogénat filtré dans un tube contenant un milieu à gradient de densité et centrifuger. Sous l’effet de la force centrifuge, les cellules viables avec une densité de flottabilité plus élevée se déposent au fond du tube pour former une pas