Isolement de cellules mononucléées du sang périphérique à partir de couches leucocytaires humaines

Les cellules mononucléées du sang périphérique, les PBMC, sont constituées d’une population hétérogène de cellules immunitaires spécialisées, notamment des lymphocytes, des monocytes et des cellules dendritiques.

Pour isoler les PBMC, commencez par un tube contenant du sang de couche leucocytaire humaine fraîchement obtenu. Le sang de la couche leucocytaire contient des PBMC, ainsi que des granulocytes à noyaux multilobés, des érythrocytes et des plaquettes en suspension dans le plasma.

Superposez soigneusement la suspension de la couche leucocytaire sur un volume égal d’un milieu à gradient de densité avec une densité spécifique souhaitée qui est optimale pour la séparation PBMC.

Lors de la centrifugation, les différents types de cellules se séparent en couches distinctes, en fonction des densités cellulaires par rapport au milieu dégradé. De plus, les polysaccharides dans le milieu à gradient de densité favorisent l’agrégation et la sédimentation des érythrocytes.

Les érythrocytes et les granulocytes les plus denses se sédimentent au fond du tube, tandis que le plasma, avec la densité la plus faible, forme la couche supérieure. Les PBMC, qui ont des densités plus faibles que le m