Isolement et purification des lymphocytes B du sang périphérique humain

Pour effectuer une séparation immunomagnétique négative des lymphocytes B, prélevez du sang périphérique humain dans un tube contenant un anticoagulant afin d’empêcher la coagulation du sang. Ajoutez des globules rouges, des globules rouges, un tampon de lyse pour lyser les globules rouges sans affecter les autres cellules sanguines.

Centrifuger pour sédimenter les cellules sanguines intactes et plus denses des globules rouges lysés moins denses, qui restent dans le surnageant. Jetez le surnageant. Remettez le granulé en suspension dans un milieu frais.

Transférez les cellules dans une plaque de culture. Incuber pour permettre aux macrophages et aux monocytes d’adhérer à la plaque tandis que les cellules non adhérentes, y compris les cellules B, restent en suspension.

Collectez les cellules en suspension dans un tube frais. Centrifuger pour granuler les cellules et les remettre en suspension dans un tampon.

Ajoutez une solution cocktail contenant des anticorps biotinylés spécifiques des cellules sanguines autres que les cellules B. Les anticorps se lient aux antigènes à la surface des lymphocytes non B, laissant les lymphocytes B non marqués.

centrifugeuse. Jetez le surnageant cont