Évaluation fonctionnelle des lymphocytes B sécrétant des anticorps à l’aide du dosage ELISpot

Les lymphocytes B sécrétant des anticorps, ou ASC, sont des lymphocytes B différenciés qui sécrètent des isotypes d’anticorps, y compris les IgG et les IgM, pour assurer une protection contre les agents pathogènes.

Pour effectuer une évaluation fonctionnelle des ASC in vitro, commencez par le dosage ponctuel immuno-enzymatique. Prenez une plaque ELISpot contenant une membrane de fluorure de polyvinylidène activée à la base.

Incuber les puits avec des fragments d’anticorps polyclonaux contenant exclusivement des régions Fab sans la région Fc de l’anticorps. Chaque région Fab possède un site de liaison pour des isotypes d’anticorps spécifiques – IgG ou IgM, permettant l’identification des deux isotypes.

Pendant l’incubation, les fragments d’anticorps se fixent à la membrane, entraînant une immobilisation.

Recouvrir les puits de solutions de blocage pour éviter les liaisons non spécifiques. Ensemencez la plaque avec des lymphocytes B sécrétant des anticorps activés et incuberez. Les ASC sécrètent différents isotypes, y compris les IgG et les IgM, qui se lient aux fragments d’anticorps liés à la membrane.

Lavez la plaque avec un tampon pour éliminer les anticorps sécrétés non liés. Tra