Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:42 min • July 8th, 2025
Les leucocytes hépatiques marginaux, MH, se trouvent collés aux parois des vaisseaux sanguins hépatiques spécialisés ou des sinusoïdes, qui sont tapissés de cellules endothéliales. Les leucocytes MH sont recrutés dans les tissus environnants en réponse à l’inflammation.
Pour récolter les leucocytes MH, commencez avec une souris euthanasiée en position couchée. Inciser les cavités péritonéale et thoracique, exposant le foie et le complexe cardio-pulmonaire.
Déplacez les intestins pour exposer la veine porte, qui transporte le sang de la rate, du tractus gastro-intestinal et de ses organes associés vers le foie. Insérez une aiguille reliée à une pompe péristaltique dans la veine porte.
Disséquez la veine cave inférieure – un vaisseau sanguin majeur transportant le sang désoxygéné du foie vers le cœur – pour recueillir le perfusat pendant la perfusion.
Perfuser le foie à travers la veine porte avec un tampon contenant un anticoagulant à faible débit pendant une courte durée. Cette étape permet d’éliminer le sang contenant des cellules non adhérentes des vaisseaux sanguins du foie par l’écoulement de la veine cave inférieure. Jetez ce perfusat contaminé par le sang.
Maintenant, perfuser à un débit plus élevé. La perfusion forcée à un débit et à des taux de cisaillement accrus perturbe l’adhérence entre les leucocytes MH et la paroi interne des vaisseaux sanguins, détachant ainsi les leucocytes MH de la paroi sinusoïdale.
Prélevez et transférez le perfusat contenant des leucocytes MH et d’autres cellules sanguines dans un tube frais. Centrifugeuse. Remettre en suspension la pastille contenant des leucocytes MH pour une analyse plus poussée en aval.
Pour prélever des leucocytes marginaux-hépatiques de souris, immédiatement après l’arrêt de la respiration, utilisez des ciseaux stériles et des pinces à tissu dentaire pour faire une incision abdominale médiane jusqu’au processus xiphoïde. Ensuite, utilisez la pince pour soulever le sternum et coupez soigneusement le diaphragme et la cage thoracique des deux côtés.
Fixez un hémostat sur le sternum et pliez la cage thoracique de manière rostrale pour exposer le complexe cardiopulmonaire. Déplacez les intestins à l’extérieur de la cavité abdominale vers la gauche de l’animal, exposant la veine porte. Ensuite, connectez une aiguille de calibre 30 à une pompe péristaltique et insérez-la dans la veine porte, rostrale à la veine splénique.
Coupez la veine cave inférieure au-dessus du diaphragme pour permettre le drainage et la collecte du perfusat de la cavité thoracique. Ensuite, allumez la pompe péristaltique à une vitesse d’environ 3 millilitres par minute et recueillez les premiers millilitres de perfusat contaminé par le sang dans la flaque de cavité thoracique. Lorsque 3 millilitres ont été recueillis, éteignez la pompe.
Ensuite, après avoir inséré une aiguille papillon de calibre 21 reliée à une seringue de 10 millilitres, relancez la perfusion à une vitesse allant jusqu’à 4 millilitres par minute jusqu’à ce que 10 millilitres de perfusat soient prélevés dans la cavité thoracique. Lorsque le foie devient brun clair, terminez la perfusion. Ensuite, transférez le perfusat dans un tube de 15 millilitres. Centrifugez-le, puis aspirez le surnageant.