Marquage des lymphocytes T auxiliaires murins à l’aide d’anticorps monoclonaux radiomarqués
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Pour radiomarquer les lymphocytes T murins auxiliaires, les lymphocytes Th porteurs d’un récepteur des lymphocytes T, TCR, spécifiques du peptide d’ovalbumine de poulet, prennent un tube contenant des anticorps monoclonaux radiomarqués, mAbs, avec l’activité radioactive souhaitée.
L’AcM comprend un AcM murin spécifique du TCR exprimé sur la membrane des lymphocytes Th murins. Un chélateur conjugue l’Acm et un isotope de cuivre émetteur de positrons, formant un complexe stable.
Diluez les anticorps monoclonaux radiomarqués avec une solution saline. Ensuite, ajoutez les anticorps monoclonaux radiomarqués dilués dans une plaque multipuits contenant une suspension de lymphocytes Th. Incuber brièvement.
Au sein de la culture, les anticorps monoclonaux radiomarqués se lient aux TCR sur les membranes des lymphocytes Th. Après l’incubation, transférez la suspension cellulaire dans un tube frais.
centrifugeuse. Jetez le surnageant contenant des anticorps radiomarqués non liés. Remettre en suspension les lymphocytes Th dans le milieu et les transférer dans une plaque multi-puits. Incuber pour une durée prolongée.
La liaison mAb-TCR radiomarquée provoque le recrutement de protéines adaptatric
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