Une technique in vitro pour différencier les cellules T auxiliaires productrices de GM-CSF des cellules T naïves

Facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages, le GM-CSF est sécrété par les cellules T auxiliaires productrices de GM-CSF ou les cellules T_HGM. Ces cellules présentent une faible expression d’autres cytokines spécifiques des lymphocytes T auxiliaires.

Pour commencer la différenciation in vitro des cellules T_HGM, prenez une suspension de cellules T auxiliaires – isolée de la rate de souris – contenant des cellules matures activées par l’antigène et des cellules naïves indifférenciées.

Ajoutez des anticorps marqués par fluorescence ciblant les marqueurs de surface caractéristiques des cellules naïves et matures. Effectuez un tri cellulaire activé par fluorescence pour isoler les lymphocytes T naïfs.

Plaquez les cellules dans un puits recouvert d’anticorps qui se lient au complexe récepteur des lymphocytes T. Ajoutez un anticorps qui se lie au récepteur de co-stimulation. La liaison synergique active les cellules.

Ajoutez de l’interleukine 7 – une cytokine – induisant la différenciation en cellules T_HGM et la production de GM-CSF. Ajoutez de l’acétate de myristate de phorbol, du PMA - un composé pro-inflammatoire, de l’ionomycine - un ionophore de calcium et un inhi