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Immunologie
0 vues • 3:50 min • July 8th, 2025
Les oligodendrocytes, qui sont des cellules spécialisées du système nerveux central, forment des gaines de myéline autour des neurones. La myéline isole l’axone et facilite la conduction rapide des impulsions électriques. La démyélinisation – la destruction de la myéline – entraîne la mort neuronale.
Pour étudier la mort neuronale, prenez un cerveau de souris transgénique fixé sur une plaque de vibratome. Immergez le cerveau dans un tampon glacé, en préservant l’intégrité structurelle lors de la section.
À l’aide d’un vibratome, obtenir des sections coronales minces. Transférez les sections dans un puits de culture contenant un milieu approprié.
Les oligodendrocytes du cerveau de la souris transgénique expriment un antigène étranger, qui se manifeste à la surface de la cellule via le complexe majeur d’histocompatibilité.
Ajoutez une solution de lymphocytes T CD8+ activés – spécifiques de l’antigène étranger – sur les sections et incuberez.
Le récepteur des lymphocytes T se lie à son antigène affiché sur l’oligodendrocyte. La molécule de co-stimulation se lie à son ligand. La liaison initie une cascade de signalisation à l’intérieur des lymphocytes T, provoquant la libération de perforine et de granzymes, des médiateurs cytotoxiques.
La perforine crée des pores dans la membrane oligodendrocytaire, par laquelle les granzymes pénètrent dans le cytoplasme. De plus, les ligands Fas sur les lymphocytes T se lient à leurs récepteurs à la surface des oligodendrocytes. Les granzymes, ainsi que la liaison du ligand Fas, induisent la voie apoptotique dans les oligodendrocytes, conduisant à la démyélinisation et à la mort neuronale.
Après l’incubation, les sections cérébrales traitées sont prêtes pour l’évaluation de la mort cellulaire.
Pour cette expérience, ayez des souris transgéniques ODC-OVA âgées de 8 à 10 semaines et des témoins C57Bl/6 appariés selon l’âge et le sexe. Comme d’habitude, hébergez les souris dans un environnement exempt d’agents pathogènes avec un accès libre à la nourriture et à l’eau. Après avoir anesthésié une souris, utilisez une pince à la patte arrière pour évaluer le niveau d’anesthésie, puis euthanasiez-la immédiatement.
Maintenant, placez une souris ventralement, désinfectez le cuir chevelu et décapitez-la. Ensuite, rapidement, coupez le cuir chevelu, ouvrez le crâne et retirez le cerveau. Fixez le cerveau en place à l’aide de colle et transférez-le sur une plaque de vibratome, puis remplissez la plaque de solution saline physiologique placedine glacée. Une fois préparé, coupez des tranches de 300 microns. Transférez les tranches dans des puits individuels d’une plaque de 12 ou 24 puits remplie d’aCSF. Ajoutez ensuite soigneusement 1/2 million de cellules T OT-I à chaque tranche.
Un demi-million de cellules activées par tranche assure une bonne interaction cellule-cellule. Une fois que les cellules commencent à migrer dans la tranche, en même temps, la quantité de cellules n’est pas trop élevée pour induire une réaction excessive. Le comptage sur cellule unique est donc possible.
Après avoir rempli tous les puits, incubez la co-culture jusqu’à huit heures. Après l’incubation, récoltez les tranches et intégrez-les dans un composé OCT, puis congelez les tranches incrustées dans de l’azote liquide et stockez-les à moins 20 degrés Celsius pour d’autres études histologiques.