Activation de lymphocytes B sur une lamelle enrobée d’antigène

L’activation des lymphocytes B implique la reconnaissance des antigènes par les récepteurs des lymphocytes B, les BCR, à leur surface pour provoquer une réponse immunitaire.

Pour étudier l’activation des lymphocytes B in vitro, il faut commencer par une lamelle contenant des antigènes et des anticorps anti-CD45R, immobilisés sur un matériau polymère. Les antigènes et les anticorps chargés négativement interagissent avec les polymères chargés positivement sur la lamelle par le biais d’interactions électrostatiques.

Recouvrir les lamelles enrobées d’un milieu contenant des lymphocytes B et incuber. La CD45R – la protéine transmembranaire des lymphocytes B – interagit avec les anticorps immobilisés, facilitant ainsi l’adhésion cellulaire.

Les BCR sur la cellule B collée interagissent avec un antigène, formant une synapse immunitaire - la région de coordination pour la signalisation cellulaire et l’internalisation de l’antigène. Cela favorise le remodelage du cytosquelette et initie la propagation cellulaire, ce qui augmente la surface cellulaire en contact avec les antigènes.

Un remodelage supplémentaire provoque le mouvement des antigènes couplés au BCR vers le centre de la synapse immunitaire. Ce réarrangement cellulaire provoque le repositionnement du centrosome près de la membrane synaptique qui guide les organites intracellulaires, y compris les lysosomes, vers la synapse.

La fusion des lysosomes avec la membrane conduit à l’internalisation des complexes antigène-BCR. Les antigènes internalisés sont transformés en fragments peptidiques, chargés sur des molécules de complexe majeur d’histocompatibilité ou CMH de classe II, et enfin présentés sur des lymphocytes B activés.

Préparez la solution d’antigène en ajoutant de l’anti-BCR et du B220 dans du PBS à une concentration finale de 10 microgrammes par mL et 7,5 microgrammes par mL respectivement. Ensuite, placez la lamelle sur un couvercle de plaque à 24 puits recouvert d’un film de paraffine et ajoutez 40 microlitres de solution antigène. Fermez la plaque, puis incubez à quatre degrés pendant la nuit.

Pour démarrer l’activation dans la lamelle, lavez-les d’abord avec du PBS et laissez-les sécher pendant quelques minutes. Ensuite, ajoutez 150 000 cellules B et incubez à 37 degrés pour les différents points temporels. Dans les deux cas, lors de l’activation avec des billes ou des lames recouvertes d’antigène, nous vous recommandons de commencer par le point temporel le plus long, puis de passer aux plus courts.