Technique pour générer un modèle murin de colite induite par le sulfate de dextran sodique

Pour induire la colite – une maladie inflammatoire de l’intestin – dans un modèle murin, prenez une souris logée dans une cage.

Remplacez l’eau de boisson par une solution de sulfate de dextran sodique, DSS, un polysaccharide induisant la colite. Laissez la souris consommer la solution pour développer une colite.

Lors de la consommation, le DSS pénètre dans la lumière du côlon de la souris. Le côlon contient une épaisse couche de mucus, fournissant une barrière physique entre les microbes commensales et la monocouche de cellules épithéliales sous-jacente.

Le DSS pénètre dans la couche de mucus et pénètre dans les cellules épithéliales. À l’intérieur des cellules, le DSS modifie l’expression des protéines de jonction serrée et induit l’apoptose, entraînant la perturbation de la couche épithéliale et de la barrière muqueuse. Cela permet l’entrée de microbes luminaux dans la lamina propria - le tissu sous-jacent avec des cellules dendritiques et des macrophages résidents.

Les cellules immunitaires reconnaissent les microbes, activant la signalisation en aval pour sécréter des cytokines pro-inflammatoires. Les cytokines provoquent l’infiltration d’un grand nombre de lymphocytes T qui développent une réponse immunitaire exagérée, entraînant une inflammation.

Surveiller la souris traitée pour détecter des troubles gastro-intestinaux et une perte de poids, indiquant l’apparition de la colite.

Euthanasier la souris et isoler chirurgicalement tout le côlon. Divisez le côlon en sections proximales, moyennes et distales et ajoutez un fixateur pour la préservation des tissus.

Le tissu est prêt pour les tests en aval afin d’évaluer la colite.

Pour induire la colite de sulfate de dextran sodique, ou colite DSS, remplacez l’eau potable habituelle par une solution DSS à 3 % ad libitum pendant sept jours, en mesurant quotidiennement le poids corporel de chaque souris, la consommation de solution DSS et la production de selles. À la fin du traitement de sept jours, placez la souris en position couchée et utilisez de petits ciseaux pour faire une incision médiane de trois centimètres de long dans l’abdomen.

Ensuite, utilisez une pince pour soulever le côlon afin de le séparer du mésentère environnant, et extrayez tout le côlon jusqu’à ce que le cæcum et le rectum soient visibles. Transecter le tissu au niveau de la marge colo-occécale et profondément dans le bassin, pour libérer respectivement le côlon proximal et le côlon distal.

Mesurez et notez la longueur du côlon isolé et utilisez une seringue de 10 millilitres équipée d’une aiguille à gavage pour rincer le côlon avec 10 millilitres de PBS glacé pour éliminer les matières fécales et le sang jusqu’à ce que l’éluat soit clair. Pour l’identification histologique, divisez les échantillons de tissus en sections proximales, moyennes et distales de taille égale, et fixez les tissus dans du paraformaldéhyde à 4 % pendant la nuit à quatre degrés Celsius.