Détermination de la production de ROS par les neutrophiles lors de l’interaction avec un biofilm opsonisé

Les bactéries marquées avec des opsonines sont reconnues par des récepteurs neutrophiles spécifiques, déclenchant la phagocytose avec des espèces réactives de l’oxygène, ou ROS, et la dégradation bactérienne.

Pour quantifier la production de ROS par les neutrophiles in vitro, on prend une plaque multi-puits. Le puits d’essai contient un biofilm de Staphylococcus aureus composé de bactéries intégrées dans un film de matrice extracellulaire. Le puits de contrôle est sans le biofilm.

Incuber le biofilm avec du sérum humain, permettant aux opsonines sériques d’opsoniser le biofilm.

Aspirez le sérum. Laver avec un tampon, en éliminant les opsonines non liées. Ajoutez des neutrophiles et du luminol – un composé chimiluminescent – dans les puits. Centrifugeuse, en amenant les neutrophiles près du biofilm.

À l’aide d’un lecteur de plaques, mesurez la luminescence au fil du temps.

Dans le puits contenant le biofilm, les neutrophiles se lient aux opsonines du biofilm, provoquant l’activation des neutrophiles et l’internalisation bactérienne dans les phagosomes. Des voies de signalisation spécifiques sont activées, provoquant l’assemblage de la NADPH oxydase sur les phagosomes.

La NADPH oxyda