Quantification de l’infection bactérienne dans les cellules hôtes par le dosage des unités formant colonies

Pour commencer le test d’unité formant une colonie, ou UFC, afin de quantifier les bactéries viables, prenez une plaque multipuits contenant des macrophages cultivés dans un milieu de croissance. Infecter les macrophages avec Listeria monocytogenes, une bactérie pathogène capable de croissance intracellulaire.

Au cours de l’infection, les macrophages engloutissent les bactéries, internalisant les bactéries dans un compartiment délimité par une membrane - un phagosome.

Les bactéries sécrètent une toxine qui forme des pores et perturbent la membrane phagosomale. Ainsi, les bactéries sont autorisées à pénétrer dans le cytosol et à se répliquer dans les macrophages.

Traitez brièvement les macrophages infectés avec de la gentamicine, un antibiotique qui élimine sélectivement les bactéries non internalisées tout en préservant les bactéries intracellulaires.

Aspirez le milieu sus-jacent contenant des antibiotiques. Ensuite, ajoutez de l’eau distillée stérile sur les macrophages infectés, créant ainsi un environnement hypotonique. Cela conduit à l’osmose, où les molécules d’eau pénètrent dans les cellules et provoquent la lyse des macrophages, libérant les composants intracellulaires, y co