Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:21 min • July 8th, 2025
Prenez une plaque multi-puits contenant une culture de macrophages. Infecter avec Listeria monocytogenes, Lm.
Les protéines de Lm se lient à des récepteurs macrophages spécifiques, internalisant les bactéries dans un phagosome. De plus, Lm sécrète des toxines formant des pores qui perturbent la membrane du phagosome, libérant des bactéries dans le cytosol, où elles se répliquent et sont entourées de filaments d’actine de l’hôte.
Les protéines ActA, induisant l’assemblage de l’actine sur Lm, induisent une polymérisation continue de l’actine à l’extrémité arrière de la bactérie. La queue de comète d’actine générée propulse Lm à travers le cytosol et pénètre dans la membrane cellulaire des macrophages, libérant du Lm polymérisé enveloppé d’actine dans le milieu.
Après l’incubation, recueillir et fixer le milieu extracellulaire, lié à l’actine et contenant du Lm à partir d’un ensemble de puits. Fixez le Lm à l’aide de paraformaldéhyde. Ajouter de l’eau distillée, rompre les macrophages et libérer le Lm intracellulaire. Prélever le Lm intracellulaire et fixer l’échantillon à l’aide de paraformaldéhyde.
Dans d’autres puits, remplacer le milieu par un milieu contenant de la gentamicine im
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