Infecter des mouches avec une suspension bactérienne à l’aide d’un nano-injecteur

Pour infecter les mouches, commencez par une aiguille de verre de diamètre étroit remplie d’huile minérale.

Fixez l’aiguille sur le piston du nano-injecteur à l’aide d’un joint torique et d’une entretoise pour une injection précise et contrôlée, garantissant ainsi un minimum de dommages aux mouches.

Libérez l’huile minérale en laissant une petite quantité dans l’aiguille comme barrière entre la solution bactérienne et l’injecteur. Chargez l’aiguille avec la suspension bactérienne.

Positionnez une Drosophila melanogaster anesthésiée sur le côté ventrolatéral vers le haut.

Injectez l’aiguille dans l’abdomen antérieur de la mouche, en perçant la cuticule et la couche épithéliale. Libérez la suspension bactérienne dans l’hémocèle – une cavité corporelle contenant l’hémolymphe – un liquide circulatoire riche en nutriments.

À l’intérieur de l’hémocèle, des cellules immunitaires appelées hémocytes circulent le long du corps adipeux, un tissu spécialisé équipé de récepteurs de reconnaissance de formes.

Laisser les mouches injectées se rétablir dans un milieu contenant un flacon. Les bactéries injectées utilisent les nutriments de l’hémolymphe et se multiplient, augmentant la charge bactérienne et établissant une infection systémique.

Les récepteurs des cellules du corps adipeux interagissent avec les antigènes bactériens, déclenchant une réponse immunitaire pour produire des peptides antimicrobiens, éliminant finalement certaines bactéries.

Les hémocytes circulants exercent une activité phagocytaire, engloutissant et dégradant quelques bactéries. Cependant, certaines bactéries échappent à la réponse immunitaire de l’hôte et survivent à l’intérieur des mouches, établissant une infection bactérienne.

Préparez une aiguille en verre en tirant sur un capillaire en verre borosilicaté et utilisez une pince pour casser la pointe de l’aiguille afin de créer une ouverture de 50 micromètres de diamètre. Ensuite, placez le joint torique d’étanchéité et l’entretoise blanche, avec la grande fossette vers l’extérieur, sur le piston métallique de l’injecteur. Remplissez l’aiguille de verre d’huile minérale à l’aide d’une seringue avec une aiguille de calibre 30.

Ensuite, placez l’aiguille en verre remplie dans la pince et placez le plus grand joint torique autour de sa base, à 1 millimètre de l’extrémité émoussée de l’aiguille. Faites glisser l’aiguille sur le piston métallique et vissez doucement la pince jusqu’à ce qu’elle soit bien fixée.

Dissipez l’huile minérale de l’injecteur en laissant un petit volume d’huile dans l’aiguille pour agir comme une barrière entre l’injecteur et la suspension bactérienne. Assurez-vous qu’il n’y a pas de bulles d’air dans l’huile minérale, la suspension bactérienne ou entre les deux liquides. Ensuite, réglez l’injecteur sur le volume souhaité pour l’injection. Insérez soigneusement l’extrémité de l’aiguille capillaire dans un tube de PBS stérile et appuyez sur le bouton de remplissage de l’injecteur pour remplir l’aiguille de l’injecteur.

Pour générer des contrôles de blessures, injectez aux mouches anesthésiées du PBS stérile dans la partie antérieure de l’abdomen sur la surface ventrolatérale. Placez les mouches injectées dans des flacons frais avec un nouveau média et posez les flacons sur le côté pour éviter que les mouches ne se collent à la nourriture avant qu’elles ne se remettent de leur anesthésie. Ensuite, éjectez le milieu stérile restant de l’injecteur et remplissez la même aiguille avec la suspension bactérienne. Répétez la procédure et injectez les mouches avec la suspension bactérienne.