Une technique de piqûre septique pour introduire une infection bactérienne systémique chez les mouches

Pour étudier la réponse immunitaire de la drosophile contre les microbes pathogènes, prenez une suspension d’agents pathogènes bactériens viables. Trempez une aiguille stérile dans la suspension en recueillant une petite quantité.

Placez une mouche anesthésiée sous un microscope de dissection. Avec l’aiguille infectée, piquez la mouche au niveau de la plaque sternopleurale du thorax. La piqûre introduit des bactéries dans l’hémolymphe – le liquide circulatoire dans la cavité corporelle.

Placez les mouches infectées dans un flacon contenant de la nourriture pour mouches et maintenez-les pendant une période adéquate.

Les bactéries utilisent l’hémolymphe comme une riche source de nutriments et se multiplient, ce qui entraîne une infection systémique. L’hémolymphe contient des hémocytes, des cellules immunitaires effectrices circulantes.

L’hémolymphe est également associée au corps adipeux, un tissu spécialisé dans le stockage de l’énergie. Les récepteurs de reconnaissance de formes sur les cellules du corps adipeux interagissent avec les bactéries. Cette interaction induit les cellules à sécréter des peptides antimicrobiens, favorisant la destruction bactérienne.

Les hémocytes circulants interagissent avec les bactéries via les récepteurs phagocytaires, provoquant leur engloutissement dans les phagosomes et entraînant leur dégradation bactérienne.

Un sous-ensemble d’agents pathogènes échappe à la réponse immunitaire de l’hôte, entraînant la mort des mouches.

Surveiller la mortalité des mouches et effectuer des tests en aval pour évaluer la réponse immunitaire contre l’agent pathogène.

Pour préparer le stylo infectieux, faites fondre l’extrémité d’une pointe de micropipette de 200 microlitres et insérez une goupille de minutien d’insecte de 0,15 millimètre dans le plastique fondu. Laissez le plastique se solidifier de sorte que la goupille soit maintenue en place avec 0,5 centimètre de goupille dépassant du plastique.

Anesthésez les mouches avec du dioxyde de carbone et piquez les mouches dans la plaque pleurale sternale du thorax avec l’aiguille en évitant les sites d’attache des ailes et des pattes. Retirez les mouches de la goupille à minutien à l’aide d’une pince molle. Assurez-vous de tremper la goupille dans la suspension bactérienne entre les piqûres de chaque mouche.

Placez les mouches piquées dans une lime fraîche avec un nouveau milieu anti-mouches en posant le flacon sur le côté jusqu’à ce que toutes les mouches se soient remises de l’anesthésie.