Mesure de la charge bactérienne d’E. coli chez Drosophila melanogaster après une infection à E. coli

Commencer avec des mouches Drosophila melanogaster adultes injectées avec E. coli. Aux moments souhaités après l’injection, transférez les mouches anesthésiées dans des tubes de microcentrifugation séparés sur de la glace, réduisant ainsi leur activité métabolique.

Ajoutez un tampon et homogénéisez les mouches, décomposant les tissus, libérant E. coli et le microbiote intestinal endogène.

Transférez chaque homogénat de mouches contenant E. coli dans des puits à plaques multipuits. Remplissez les puits restants avec un tampon. Effectuer une dilution en série de l’homogénat contenant E. coli.

Déposez la suspension d’homogénat dilué de chaque puits ainsi que des points discrets sur une plaque de gélose nutritive, en commençant par la dilution la plus faible. Laissez les taches absorber dans la gélose. Incuber la plaque pendant la nuit pour permettre la multiplication d’E. coli, formant des colonies visibles. La durée d’incubation est essentielle pour empêcher la formation de colonies endogènes du microbiote intestinal de la mouche.

Comptez les colonies d’E. coli pour chaque mouche à partir des dilutions avec des colonies non chevauchantes. Calculez l’unité formant la colonie – la char