Une technique in vitro pour étudier la formation du complexe inflammasome dans les macrophages

Commencez par une plaque contenant une culture de macrophages primaires.

Introduire le lipopolysaccharide bactérien, LPS, qui se lie aux récepteurs de type Toll sur les macrophages, déclenchant la régulation positive de la protéine NLR de la famille des pyrines contenant 3 ou NLRP3.

Ajoutez un ionophore qui médie l’efflux d’ions potassium. La diminution du potassium cytosolique active NLRP3. NLRP3 activée oligomérise et induit le recrutement d’une protéine adaptatrice, qui à son tour recrute la pro-caspase-1, formant un inflammasome.

L’auto-protéolyse convertit la pro-caspase-1 en caspase-1 active, qui médie la mort cellulaire inflammatoire ou la pyroptose. Les dommages à l’ADN pendant la pyroptose entraînent la condensation nucléaire.

Fixez les cellules et traitez-les avec un détergent pour les perméabiliser.

Ajoutez un anticorps primaire se liant à la protéine adaptatrice associée à l’inflammasome, et un anticorps secondaire marqué par fluorescence qui se lie à l’anticorps primaire, marquant l’inflammasome.

Introduisez une coloration fluorescente à l’acide nucléique pour marquer le noyau. Sous un microscope à fluorescence, les cellules présentent des noyaux condensés – indiquant