Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:02 min • July 8th, 2025
Prenez une plaque de dosage contenant des macrophages amorcés avec du lipopolysaccharide.
L’amorçage augmente l’expression des précurseurs pro-inflammatoires inactifs des cytokines et des protéines NLRP3.
Ajoutez de la nigéricine, un ionophore de potassium, favorisant l’efflux d’ions. Cela perturbe les niveaux de potassium intracellulaires, déclenchant les protéines NLRP3, pour former un grand complexe.
L’oligomérisation NLRP3 recrute les protéines adaptatrices, ASC, provoquant leur polymérisation. Les filaments ASC recrutent la pro-caspase-1, formant l’inflammasome NLRP3, un complexe multiprotéique.
La pro-caspase-1 subit une auto-activation induite par la proximité, générant la caspase-1. La caspase-1 clive la cytokine pro-inflammatoire et la protéine gasdermine-D, créant ainsi un pore de membrane plasmique.
Cela entraîne la sécrétion de cytokines et la mort cellulaire programmée inflammatoire, la pyroptose, la libération de contenus intracellulaires, y compris la lactate déshydrogénase, ou LDH. Prélevez le surnageant contenant de la LDH.
Ajoutez un mélange de substrat - lactate, violet d’iodonitrozolium ou colorant INT, NAD+ et diaphorase. La LDH oxyde le lactate en pyruvate tou
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