Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 2:57 min • July 8th, 2025
Prenez un tube de verre contenant un homogénat de neutrophiles avec des composants intracellulaires libérés.
Ajoutez du méthanol, un solvant polaire, qui perturbe les interactions lipides-lipides et lipides-protéines. La polarité inhérente au méthanol répartit uniformément les lipides polaires, en les solubilisant. Ensuite, ajoutez du chloroforme, un solvant organique non polaire, qui interagit avec les lipides non polaires, ce qui les disperse et se solubilise.
Centrifugeuse pour séparer la pastille contenant des protéines du surnageant contenant des lipides, des polysaccharides et des débris cellulaires. Transférez le surnageant dans un tube en verre frais. Ajouter le chloroforme et l’eau distillée. Centrifugez l’échantillon.
L’ajout d’eau forme spontanément un système biphasique, répartissant les biomolécules dans les couches inférieures de chloroforme et les couches supérieures d’eau-méthanol.
La couche de chloroforme comprend des lipides non polaires dissous, tandis que la couche supérieure contient des contaminants non lipidiques et davantage de lipides polaires. Retirez la couche supérieure d’eau-méthanol sans perturber la couche contenant des lipides.
Utilisez un concentrat
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