Technique permettant d’évaluer la réponse immunitaire contre un antigène en induisant une inflammation cutanée

Prenez une souris anesthésiée avec des oreilles épilées et appliquez l’antigène du test – un haptène mélangé à une solution de véhicule appropriée – sur la peau exposée. La solution exciplinée facilite la pénétration haptène à travers la couche externe de l’épiderme pour atteindre le derme sous-jacent.

L’haptène se lie aux protéines de la peau, formant un immunogène reconnu par les cellules présentatrices d’antigène ou APC. Lors de l’engloutissement, les APC traitent et affichent l’immunogène à leur surface.

Les APC migrent vers les ganglions lymphatiques, présentant l’immunogène aux lymphocytes T naïfs et les activant. Les cellules activées se différencient en cellules T à mémoire amorcées, dont un sous-ensemble migre vers la peau.

Lors de la réexposition haptène, les APC présentent l’immunogène aux lymphocytes T amorcés, induisant la libération de cytokines pro-inflammatoires.

Les cytokines déclenchent la libération de kératinocytes et de mastocytes par des chimiokines, qui se lient aux neutrophiles circulants, facilitant ainsi leur extravasation. Les neutrophiles extravasés atteignent le site de l’inflammation.

Les cytokines activent les neutrophiles pour produire des enzymes protéolytiques et des espèces réactives de l’oxygène, causant des lésions tissulaires et amplifiant l’inflammation.

Pour commencer, anesthésez la souris avec une injection intrapéritonéale d’un cocktail anesthésique et confirmez la sédation adéquate avec un test de pincement des orteils. Ensuite, appliquez de la crème dépilatoire sur la surface dorsale des deux oreilles. Essuyez-le dans la minute qui suit et lavez la peau à l’eau.

Mesurez l’épaisseur de l’oreille où les applications ont été faites à l’aide d’un micromètre. Plus tard, remettez la souris dans sa propre cage une fois qu’elle est sortie de l’anesthésie et laissez-la se reposer pendant au moins trois jours avant de procéder à d’autres tests.

Après trois jours, anesthésie à nouveau la souris et mesure à nouveau l’épaisseur de l’oreille pour s’assurer qu’elle n’est pas irritée. Ensuite, appliquez 12,5 microlitres d’oxazolone à 1,25 % de chaque côté de l’oreille droite et appliquez 12,5 microlitres de la solution de véhicule d’acétone-huile d’olive de chaque côté de l’oreille gauche.

Comme toujours, observez la souris se remettre de l’anesthésie. 24 heures plus tard, mesurez à nouveau l’épaisseur de l’oreille sous anesthésie, pour vous assurer que l’inflammation cutanée induite par l’oxazolone s’est produite.