Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Prenez une plaque multi-puits contenant des macrophages.
Ajouter Cryptococcus neoformans aux puits d’essai, tandis que les puits de contrôle ne contiennent que des macrophages.
Les macrophages phagocytent les champignons à l’intérieur des phagosomes.
Laver avec un tampon pour éliminer les champignons non phagocytés. Ajouter un milieu sans antibiotiques. Couver.
Le phagosome fusionne avec le lysosome, formant un phagolysosome. Les champignons modulent le pH des phagolysosomes et possèdent des mécanismes intrinsèques pour survivre aux conditions difficiles du phagolysosome. Les champignons perméabilisent la membrane phagolysosomale et se répliquent, accompagnés d’une accumulation cytosolique de vésicules remplies de polysaccharides.
La résidence et la réplication fongiques intracellulaires causent des dommages cellulaires, déclenchant des voies de mort cellulaire. Cela provoque la lyse des macrophages et la libération de contenu intracellulaire, y compris la lactate déshydrogénase ou LDH, dans les milieux.
Collectez des supports contenant de la LDH à différents moments. Lyser les macrophages de contrôle à des points de temps similaires pour une libération cellulaire maximale de LDH.
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