Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Commencez par ensemencer des cellules hôtes de mammifères dans le compartiment inférieur d’un système membranaire perméable.
Ajoutez Streptococcus - une bactérie pathogène connue pour sécréter la toxine streptolysine S ou SLS, à l’insert de la membrane. La toxine SLS se diffuse à travers le pore de la membrane et atteint la cellule hôte.
Les cotransporteurs membranaires de bicarbonate de sodium régulent le transport des ions, maintenant l’homéostasie cellulaire. La toxine se lie à ces cotransporteurs, perturbant le transport des ions et provoquant un stress osmotique dans les cellules hôtes.
Cela active plusieurs cascades de signalisation en aval, y compris p38 MAPK, une voie de protéine kinase activée par les mitogènes. Activé p38 MAPK phosphoryle ses cibles en aval, initiant une réponse cellulaire contre les bactéries.
Ensuite, retirez l’insert de membrane perméable. Aspirez le milieu au-dessus des cellules hôtes. Ajoutez un tampon de lyse pour libérer le contenu cellulaire. Centrifugeuse pour granuler les débris de la cellule.
Prélever le surnageant contenant des composants solubles du lysat et la pastille contenant des composants insolubles du lysat. Conservez les échantillons
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