Détection de l’adhérence bactérienne aux cellules hôtes à l’aide de l’imagerie par fluorescence

Prenez une plaque multi-puits contenant une monocouche de cellules épithéliales adhérentes sensibles à l’adhérence bactérienne.

Ajoutez un nombre variable de Pseudomonas aeruginosa marqué par des protéines fluorescentes, une bactérie pathogène, pour obtenir le rapport bactérie/cellule épithéliale souhaité.

Centrifugeuse pour rapprocher les bactéries des cellules épithéliales, facilitant ainsi les interactions.

Les pili de type IV, des fibres protéiques sur les bactéries, jouent un rôle central en se liant à des glycolipides spécifiques sur les cellules épithéliales, médiant l’adhésion bactérienne aux cellules hôtes.

Après l’incubation, laver avec un tampon pour éliminer les bactéries non adhérentes. Fixez les cellules pour préserver la structure cellulaire.

Ajoutez du DAPI, une coloration fluorescente qui se lie fortement aux régions d’ADN riches en A-T, colorant le noyau. Couvrez les cellules avec un tampon pour éviter le dessèchement des cellules.

Acquérir des images des bactéries marquées à la GFP attachées aux cellules épithéliales avec un noyau coloré au DAPI. Énumérez les bactéries adhérentes sur une seule cellule épithéliale.

L’augmentation du nombre de bactéries adhérentes