Analyse des synapses immunitaires entre les lymphocytes T humains et les cellules Raji chargées par SEB à l’aide de la cytométrie en flux d’imagerie

Prenez des tubes de cytométrie en flux contenant des cellules de Raji déchargées et des cellules de Raji chargées d’entérotoxine B de Staphylococcus aureus ou de cellules de Raji chargées de SEB.

Ces cellules Raji chargées de SEB fonctionnent comme des lymphocytes B présentateurs d’antigène de substitution contenant le superantigène SEB complexé à des molécules du CMH de classe II.

Incuber avec des pan-leucocytes.

Les récepteurs des lymphocytes T, les TCR des lymphocytes T, se lient aux SEB des cellules Raji, qui, avec des signaux de co-stimulation, établissent une jonction cellule-cellule stable, une synapse immunitaire, conduisant à l’activation des lymphocytes T.

Cela déclenche des voies de signalisation intracellulaires, provoquant le réarrangement du cytosquelette d’actine, avec le regroupement des molécules de signalisation et des récepteurs de surface au sein de la synapse.

Après l’incubation, fixez les cellules pour préserver leurs structures cellulaires. Perméabiliser les cellules pour accéder aux cibles intracellulaires.

Ajoutez des anticorps anti-CD3 marqués au fluorophore, de la phalloïdine et du DAPI, qui se lient à CD3 dans le complexe TCR, les filaments d’actine et l