Introduction de protéines effectrices bactériennes dans des cellules de mammifères par électroporation

Certains pathogènes bactériens à Gram négatif entrent en contact avec les cellules hôtes et utilisent des systèmes de sécrétion pour injecter des protéines effectrices, facilitant ainsi l’invasion cellulaire.

Pour administrer des protéines effectrices dans des cellules de mammifères in vitro, pipetez des cellules de mammifères dans une cuvette réfrigérée. Ajouter les protéines effectrices bactériennes marquées au peptide de liaison à la streptavidine et mélanger.

Effectuer l’électroporation. Pendant la course, de courtes impulsions électriques perturbent la bicouche lipidique de la membrane de la cellule hôte pour former des pores transitoires, facilitant l’entrée cellulaire des protéines effectrices. Placez les cellules sur une plaque de verre contenant un support, permettant aux cellules de récupérer et d’adhérer à la plaque. Les pores se referment, piégeant les protéines à l’intérieur.

Après la récupération cellulaire, fixez et perméabilisez les cellules pour permettre aux anticorps d’accéder aux cibles intracellulaires. Incuber avec une solution bloquante contenant des protéines pour éviter la liaison d’anticorps non spécifiques. Ajoutez des anticorps primaires qui se lient spé