Un modèle d’infection à macrophages entièrement différencié de cellules dérivées de monocytes avec Mycobacterium tuberculosis

Obtenir une culture de macrophages entièrement différenciés dans une plaque multi-puits. Ces macrophages ont des marqueurs de surface, tels que des récepteurs de type Toll ou TLR-2 - un récepteur de reconnaissance de formes qui identifie divers composants microbiens.

Ajouter une quantité appropriée de Mycobacterium tuberculosis ou de suspension de cellules Mtb marquées par fluorescence dans chaque puits et incuber.

TLR-2 reconnaît le lipoarabinomannan, ou LAM, un composant glycolipidique complexe de la paroi cellulaire de Mtb, initiant la phagocytose. Le macrophage internalise Mtb, séquestrant la bactérie dans un phagosome – un compartiment lié à la membrane.

Le phagosome mûrit, en fusionnant avec des lysosomes, formant un phagolysosome - un compartiment acide et riche en enzymes.

Au sein du phagolysosome, le Mtb inhibe la pompe à protons de type vacuolaire responsable de la génération d’un pH acide. Par conséquent, le pH à l’intérieur du phagolysosome devient presque neutre, désactivant les enzymes qui dégradent les agents pathogènes engloutis.

L’interaction entre LAM et TLR2 affecte également les voies de signalisation de la cellule hôte, conduisant à la modulation des marqueurs de surface impliqués dans la présentation de l’antigène.

L’inactivation du phagolysosome et l’inhibition de la réponse immunitaire de l’hôte permettent à Mtb de persister et de se répliquer dans le macrophage.

Pour infecter les cellules dérivées de monocytes, diluez la bactérie à une concentration de 5 fois 10 à la sixième unité formant colonie par millilitre dans un milieu sans sérum, et remplacez le surnageant dans chaque puits de la plaque de culture cellulaire à six puits, par 1 millilitre de milieu frais sans sérum et 1 millilitre de suspension de bactéries par puits pour obtenir une multiplicité d’infection de 5.

Après une incubation de 4 heures dans l’incubateur de culture cellulaire, laver chaque puits trois fois avec 1 millilitre de tampon de lavage stérile par lavage, en inclinant soigneusement la plaque pour retirer tout le volume de tampon des coins des puits après chaque lavage. Ensuite, mettez en suspension les cellules dérivées de monocytes infectées par MTb dans 2 millilitres de milieu complet sans antibiotiques.