Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:00 min • July 8th, 2025
Prenons l’exemple d’une souris anesthésiée conçue pour exprimer une protéine fluorescente dans les neutrophiles. Rasez le dos et créez une coupe circulaire. Excisez la peau coupée pour révéler le fascia - une couche de tissu conjonctif en dessous.
Prenez une seringue contenant une suspension de Staphylococcus aureus – une bactérie pathogène – génétiquement modifiée pour produire de la bioluminescence. Injectez la suspension entre le fascia et le tissu sous-jacent, générant une infection localisée de la plaie.
Les récepteurs de reconnaissance de formes sur les cellules stromales du fascia reconnaissent les motifs moléculaires associés aux agents pathogènes sur les bactéries. Cette liaison induit la libération de cytokines et de chimioattractants pro-inflammatoires, ce qui entraîne une inflammation.
Les chimioattractants recrutent les neutrophiles circulatoires au site de l’infection. Les neutrophiles entrants engloutissent les bactéries dans un phagosome qui fusionne avec les granules cytoplasmiques, provoquant la libération de peptides antimicrobiens.
La NADPH oxydase – un complexe enzymatique – s’assemble sur la membrane du phagosome et produit des espèces réactives de l’oxygène ou ROS. Les peptides antimicrobiens et les ROS provoquent la dégradation bactérienne.
En contre-réponse, les bactéries sécrètent des facteurs de virulence qui perméabilisent la membrane des neutrophiles, provoquant la lyse cellulaire. Les bactéries libèrent également des enzymes pour le dépôt de fibrine afin d’éviter la phagocytose.
La réponse immunitaire conduit à un abcès – une capsule de fibrine contenant des cellules bactériennes, des neutrophiles et des cellules mortes.
Enregistrez la fluorescence des neutrophiles et la bioluminescence bactérienne pour visualiser l’interaction bactéries-neutrophiles.
Pour l’inoculation du staphylocoque doré, remplissez une seringue d’insuline de calibre 28 avec 50 microlitres de l’inoculant bactérien bioluminescent préparé, et utilisez un doigt pour tirer le derme de l’animal blessé sur le côté. En tenant la seringue presque parallèle au tissu, insérez-la lentement dans le tissu jusqu’à ce qu’une diminution soudaine de la résistance se fasse sentir, indiquant un perçage du fascia.
Avec l’aiguille placée au centre de la plaie, délivrez lentement tout le volume de l’inoculant. Confirmez que l’inoculant forme une bulle au centre de la plaie avec une fuite ou une dispersion minimale, et retirez lentement la seringue de l’animal. Ensuite, retournez l’animal dans sa cage avec chaleur et surveillance jusqu’à ce qu’il se rétablisse complètement.