Un test pour étudier le rôle de la vitronectine dans l’adhésion bactérienne aux cellules épithéliales de l’hôte
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:53 min • July 8th, 2025
Prenez une plaque multi-puits contenant des monocouches de cellules épithéliales adhérentes. Remplacez le milieu par un milieu sans sérum, évitant ainsi l’interférence des protéines sériques. Après l’incubation, retirer le milieu. Lavez les cellules avec un tampon. Ajoutez un milieu réfrigéré sans sérum contenant de la vitronectine. Incuber à des températures plus basses.
Le domaine RGD N-terminal de la vitronectine se lie aux récepteurs de l’intégrine de surface des cellules épithéliales. Les températures plus basses inhibent l’internalisation cellulaire du complexe vitronectine-intégrine.
Après la saturation des récepteurs de l’intégrine, retirez le milieu. Laver avec un tampon pour éliminer l’excès de vitronectine, qui pourrait avoir un impact sur la liaison de l’intégrine dépendante de la vitronectine.
Ajouter Haemophilus influenzae de type f, ou Hif, une suspension pathogène bactérien à Gram négatif. Couver.
La protéine H à la surface de Hif se lie à l’extrémité C-terminale de la vitronectine, facilitant l’adhésion de Hif à la cellule épithéliale et l’internalisation ultérieure.
Retirez le support et lavez-le avec un tampon pour éliminer le Hif non lié. Utilisez une enzyme de
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