Détermination du rôle de la vitronectine dans la résistance bactérienne à l’activité bactéricide du sérum humain

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Pour étudier l’impact de la vitronectine – une glycoprotéine sérique humaine – sur les bactéries, commencez par des tubes contenant la suspension d’Haemophilus influenzae.

Traitez un tube avec du sérum humain normal contenant de la vitronectine et l’autre avec du sérum appauvri en vitronectine. Les deux variantes sériques contiennent des anticorps et diverses protéines du complément, essentielles à l’activité bactéricide.

Pendant l’incubation, les anticorps interagissent avec les protéines de surface bactériennes, activant les protéines du complément pour former la convertase C5, qui clive C5. C5b s’associe à C6, suivi de C7, formant le complexe C5b6-7. Ce complexe se lie à la membrane cellulaire bactérienne et recrute C8, formant C5b67-8.

Ce processus facilite la fixation des monomères C9 et leur polymérisation, générant le complexe d’attaque membranaire - une structure formant des pores. Ces pores provoquent l’afflux d’ions et d’eau, entraînant une lyse bactérienne.

En revanche, dans le tube avec un sérum normal, la vitronectine se lie à une protéine de surface bactérienne qui interagit avec le complexe C5b6-7 et les monomères C9. Ces interactions empêchent le recrutement de C8 et la polymérisation de C9, inhibant la formation du complexe d’attaque membranaire et conduisant à la survie bactérienne.

Prélever la suspension bactérienne des tubes et de la culture sur des plaques de gélose individuelles.

Les colonies bactériennes plus élevées dans le sérum contenant de la vitronectine confirment son rôle dans la résistance bactérienne contre l’activité bactéricide du sérum humain.

Pour effectuer l’analyse de la résistance dépendante de la vitronectine à l’activité bactéricide du sérum humain, il faut d’abord cultiver et granuler les bactéries comme décrit dans le protocole de texte. Après la centrifugation, remettre en suspension la pastille bactérienne avec 1 volume de tampon de gélatine véronique de dextrose. Ajoutez maintenant 1 500 UFC de bactéries à 100 microlitres de DGVB++ contenant 5 % de sérum.

Incuber l’échantillon à 37 degrés Celsius pendant 15 minutes en secouant à 300 tr/min. Retirer une aliquote de 10 microlitres du mélange réactionnel à 0 minute et 15 minutes. Placez l’aliquote sur de l’agar au chocolat et incubez l’assiette à 37 degrés Celsius pendant la nuit. Après l’incubation des plaques de gélose au chocolat, comptez les colonies apparaissant sur la plaque et calculez le pourcentage de bactéries tuées comme décrit dans le protocole textuel.

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Dernière mise à jour : 15 août 2026