Injection sous-cutanée d’un antigène bactérien pour induire une inflammation systémique dans un modèle murin

Pour induire une inflammation systémique – une réponse inflammatoire généralisée, commencez par positionner une souris anesthésiée avec sa face dorsale vers le haut. Prenez une seringue contenant une émulsion mycobactérienne de dépôts d’antigène-adjuvant mycobactérien - un réservoir d’huile localisé du mélange antigène-adjuvant

Percez les couches cutanées de l’épiderme et du derme de la souris et injectez l’émulsion adjuvante antigénique sous-cutanée à proximité du ganglion lymphatique inguinal. Après l’injection, le dépôt libère continuellement des antigènes dans les tissus environnants, ce qui permet une exposition prolongée des antigènes au système immunitaire.

Les cellules présentatrices d’antigènes, ou APC, dans le tissu, interagissent avec les antigènes mycobactériens injectés, les internalisent et les transforment en peptides. Ces peptides sont ensuite présentés à la surface des APC à l’aide de complexes majeurs d’histocompatibilité, déclenchant la libération de cytokines et de chimiokines pro-inflammatoires.

Ce processus génère une inflammation localisée et déclenche l’ouverture des vaisseaux lymphatiques, permettant l’entrée des cellules immunitaires, y compris les APC porteuses d’antigènes, dans le système lymphatique et atteignant le ganglion lymphatique inguinal.

Dans les ganglions lymphatiques, les récepteurs des lymphocytes T auxiliaires interagissent avec les antigènes à la surface des APC et s’activent. Les lymphocytes T activés libèrent des cytokines pro-inflammatoires, qui voyagent à travers les vaisseaux lymphatiques et sont libérées dans divers autres tissus.

Les cytokines pro-inflammatoires libérées attirent les cellules immunitaires vers ces tissus, induisant une inflammation systémique.

Pour commencer, débrouillez le corps de l’unité de conversion du sonicateur et nettoyez la sonde avec un tampon d’alcool à 70 %. Ensuite, allumez le sonicateur et réglez le réglage de puissance sur 4, en tournant le bouton de commande de puissance.

Ensuite, pour générer une suspension fine de Mycobacterium tuberculosis H37Ra dans du PBS, plongez l’extrémité de la sonde dans la poudre mycobactérienne contenant du PBS. Sonicez le mélange sur de la glace pendant 30 secondes, puis faites une pause de 30 secondes et répétez l’opération pendant un total de 5 minutes pour disperser complètement la poudre en une suspension uniforme sans chauffer le liquide. Ensuite, ajoutez 2,5 millilitres de l’adjuvant incomplet de Freund au mélange et répétez le processus de sonication sur de la glace jusqu’à ce que l’émulsion forme une consistance semblable à celle d’un dentifrice.

Pour l’injection sous-cutanée, chargez 200 à 300 microlitres de l’émulsion mycobactérienne dans une seringue de 1 millilitre. Expulsez l’air de la seringue et continuez à remplir la seringue, en inversant et en tapotant par intermittence, jusqu’à ce qu’elle soit remplie.

Ensuite, placez les injections sous-cutanées sur la surface dorsale des hanches ou sur la surface ventrale des jambes proximales de la région des ganglions lymphatiques inguinaux d’une souris C57Black/6J anesthésiée de 6 à 10 semaines. Insérez délicatement l’aiguille en prenant soin de ne pas pénétrer le muscle, et injectez 50 microlitres de l’émulsion dans l’espace sous-cutané. Ne retirez pas l’aiguille immédiatement pour permettre à l’émulsion épaisse d’être complètement injectée.